Бычий и бараний инсулины имеют совершенно одинаковую третичную структуру и различаются лишь одной аминокислотой (остаток 9 в А-цепи). Клоны индукторных клеток мыши, иммунизированной бычьим инсулином, активируются под действием бычьего, но не бараньего инсулина; клоны, полу-ченные от мышей, иммунизированных бараньим инсулином, обладают обратной специфичностью. Эти данные наряду с другими показывают, что индукторная Т-клетка может отличить ассоциированные с молекулой класса II белки, раз-личающиеся всего по одной аминокислоте [65].
Хотя ясно, что специфичность активации индукторных клонов исключи-тельно высока, значительно хуже доказано, что эти клоны синтезируют рас-творимые белки, способные различать два антигена, не связанные с молекулами класса II. Одной из причин, дающих основание подозревать, что такие индукторные молекулы могут играть роль в антиген-специфической стимуляции В-клеток, служат результаты исследования молекул, синтезируемых и, вероятно, секретируемых клонами ...

Более строгая и информативная техника Т-клеточных клонов (без исполь-зования гибридизации) была с успехом применена в исследовании Т-супрес-сорного клона (Lyl~2+) «CI.LY23.4», экспрессирующего на поверхности рецепторы гликофорина эритроцитов барана [68—70]. Анализ свойств этого Т-клона показал, что его клетки во многом сходны с образующими антитела В-клетками. Оба типа клеток имеют примерно равное число поверхностных рецепторов, взаимодействующих с антигеном в отсутствие продуктов МНС, и отвечают на сигналы индукторных клеток секрецией антигенсвязывающих белков. Клетки клона GI.LY23.4 секретируют белки с молекулярной массой 70 кДа, которые связываются с антигеном и осуществляют супрессию. Пикограммовые количества очищенного антигенсвязывающего белка специфично подавляют уже начавшийся иммунный ответ на антиген.

Для изучения структурной основы этой активности была использована деградация очищенных Т-супрессорных молекул (Тс) под действием протеоли-тических ферментов. ...

При протеолитическом расщеплении Ig папаином образуются два фрагмента: Fc и Fab. Фрагменты цепей Ig, содержащиеся в препаратах Fab, имеют молекулярную массу около 22 кДа, соответствуют антигенсвязывающему участку Ig и содержат последовательности, закодированные в генах VH. Фрагмент Fc имеет молекулярную массу около 50 кДа, отвечает за биологическую активность различных классов иммуноглобулинов и кодируется С-генами. Каждый продукт гена С обладает характерными «изотипическими» детерминантами, которые серологически можно обнаружить с помощью антител. Молекулы Тс, полученные из клонированных Т-клеток, как показывают результаты протеолиза папаином, по-видимому, также состоят из двух функционально различных f доменов: V-района (24 кДа), специфически связывающегося с антигеном, но не обладающего супрессорной активностью, и С-района (45 кДа), который не связывается с антигеном, но неспецифически подавляет синтез антител. Как указывалось выше, 45 кДа субъединица, по-видимому, имеет общие с ...

Последние 10 лет отмечены важными достижениями в иммунологии. Тем не менее в идентификации эндогенных регуляторных молекул, образуемых супрессорными и индукторными Т-клетками, успехи невелики. Для прогресса в этой области необходимо иметь неограниченно растущие гомогенные попу-ляции клеток, секретирующих большие количества регуляторных веществ. Так, например, гомогенные опухоли, секретирующие иммуноглобулины (мие-ломы), позволили выяснить строение молекул антител. К сожалению, опухолевые Т-клетки оказались менее полезны. Многие из них плохо расту т в культуре, и лишь небольшая часть сохраняет способность выполнять иммунологические функции.
Основным методическим достижением в этой области стала разработка общих методов получения клонов, все клетки которых произошли из одной родительской клетки [62, 63]. Клонированные клетки можно хранить в замо-роженном состоянии: после размораживания они сохраняют молекулярные маркеры и функциональные свойства антиген-специфических индукторны ...

Пикограммовые количества очищенного 70 кДа Тс-белка полностью по-давляют иммунный ответ на сложный клеточный антиген, даже будучи введен-ными после антигена. На основании структурных свойств этих молекул можно предположить следующий механизм осуществления биологической активности. Соединение 70 кДа молекул с Т-индукторными клетками, связавшими специ-фическую антигенную детерминанту, приводит к повышению чувствительности Тс-молекул к протеиназе, расположенной на поверхности индукторной клетки. В результате высвобождается 45 кДа субъединица. Эта субъединица подавляет активность всех Т-индукторных клеток, связывающих молекулы, содержащие узнаваемый Тс-белком эпитоп. В результате этой реакции монокло-нальная Тс-молекула подавляет иммунный ответ даже на сложно устроенные чужеродные клетки, если они содержат хотя бы один участок, узнаваемый Тс-белком. Важная особенность этого механизма заключается как раз в том, что он обеспечивает эффективную супрессию иммунного ответа на сложные чуже-ро ...

Возможность использования маркеров Ly для предсказания функции и МНС-специфичности клеток, вообще говоря, требует строгой проверки, что важно как по практическим, так и по теоретическим соображениям. Прямой подход к этой задаче может состоять в отборе Т-клеток исключительно по их фенотипу Ly, получении из них клонов и определении того, насколько соот-ветствуют фенотипу Ly функция и антигенная специфичность этих клонов.

В большой серии таких экспериментов Т-клетки стимулировали клетками, полностью или почти полностью отличающимися от них по МНС [59]. Т-клетки разделяли исключительно по их фенотипу и помещали в культуру для получения большого числа клонов. Более 30 таких клонов периодически ис-следовали в ходе 18-месячного культивирования. Те клоны, которые исходно отбирали на фенотип Lyl+2" («Lyl-клоны»), более года оставались Lyl+2"", а клоны, отобранные на фенотип Lyl"2+ (Лу2-клоны>>), на протяжении того же времени сохраняли свой фенотип.
Все Lyl-клоны выполняли ...

В настоящее время отсутствует удовлетворительное объяснение молеку-лярного механизма совместного распознавания индукторными клетками ан-тигена и молекул МНС класса II. Это вызвано двумя причинами. Во-первых, трудно сделать какие-либо выводы о механизме специфического распознавания из работ, в которых показано, что вещества, секретируемые Т-клетками, теряют свою биологическую активность, будучи пропущены через колонкус антигеном. Во-вторых, сам вопрос обычно не формулируется в точных моле-кулярно-генетических терминах.
Полезно рассмотреть явление специфичности и сродства вначале на при-мере молекул, изученных лучше, чем рецепторы Т-клеток. Триумфом совре-менной биологии было выяснение генетической и структурной основы связы-вания молекул антител с антигеном. Около десяти лет назад стало ясно, что, как и сывороточные антитела, миеломные белки могут связываться с простыми химическими детерминантами, такими, как гаптены и простые сахара. Вначале считалось, что эти антитела с ...

Результаты первых экспериментов хорошо укладывались в представление о том, что Т-клетки образуют однородную популяцию, способную выполнять различные иммунологические функции, включая как активацию, так и подав-ление иммунных реакций. Отсюда вытекает, что экспрессируемая функция Т-клеток должна определяться внешними условиями, такими, как тип антигена и характер антигенной стимуляции. Согласно другой гипотезе, Т-клетки состоят из субпопуляций, специализированных для выполнения одной определенной Т-клеточной функции [1—3]. Этот вопрос сводился к практической проблеме: можно ли разделить популяцию Т-клеток на различные субпопуляции, каждая из которых при контакте с антигеном способна осуществлять одну определенную Т-клеточную реакцию? Наиболее эффективный метод иден-тификации и разделения субпопуляций периферических Т-клеток был раз-работан в результате изучения таких поверхностных гликопротеинов, которые экспрессируются клетками, подвергающимися тимусзависимой дифференци-ровке. В осно ...

Стимулированные клоны индукторных Т-клеток в свою очередь стимули-руют размножение, а также созревание клеток многих типов: В-клеток, су-прессорных и цитотоксичных Т-лимфоцитов, макрофагов и предшественников кроветворных клеток. Клоны индукторных Т-клеток активируют те или иные клеточные популяции, секретируя набор пептидов. Каждому типу активируемых клеток соответствует свой пептид [34, 36, 38, 39, 63].
Практически все исследованные к настоящему времени индукторные клоны секретируют определенный набор из 8—12 пептидов, отличающийся от набора пептидов, секретируемых супрессорными Т-клетками [34, 36]. Один из этих пептидов по данным хроматографии на сефакриле имеет кажущуюся молекулярную массу 30 кДа и по своим свойствам соответствует предвари-тельно описанным факторам, стимулирующим рост цитотоксических, а также, возможно, супрессорных Т-клеток. Дальнейшее биохимическое исследование показало, однако, что он состоит из двух субъединиц с молекулярной массой 16 и 14 кДа. Митогенн ...

Наиболее многочисленная субпопуляция Т-клеток, имеющая фенотип Lyl23, оказалась наименее изученной. Связано это, по-видимому, с тем, что многие клетки этой популяции относятся к промежуточному типу: они не несут прямых иммунологических функций, но имеют рецепторы и могут развиваться в зрелые клетки Lyl и Ly23. Так, например, клеточные линии, полученные из клеток Lyl23 в результате непрерывной стимуляции in vitro обычными антигенами или продуктами генов МНС или же поддерживаемые добавлением «факторов роста» [15, 16], дают начало клеткам Ly23, составляющим 90—100% клеток с цитолитической или супрессорной активностью, а так же, как показали Шен и др. [17],— Т-хелперным клеткам Lyl. Эти результаты позволяют предположить, что постепенная потеря предшественниками с фенотипом Lyl23 антигенов Lyl или Ly23 коррелирует с приобретением ими зрелой цитолитической или индукторной функции. ...