Более строгая и информативная техника Т-клеточных клонов (без исполь-зования гибридизации) была с успехом применена в исследовании Т-супрес-сорного клона (Lyl~2+) «CI.LY23.4», экспрессирующего на поверхности рецепторы гликофорина эритроцитов барана [68—70]. Анализ свойств этого Т-клона показал, что его клетки во многом сходны с образующими антитела В-клетками. Оба типа клеток имеют примерно равное число поверхностных рецепторов, взаимодействующих с антигеном в отсутствие продуктов МНС, и отвечают на сигналы индукторных клеток секрецией антигенсвязывающих белков. Клетки клона GI.LY23.4 секретируют белки с молекулярной массой 70 кДа, которые связываются с антигеном и осуществляют супрессию. Пикограммовые количества очищенного антигенсвязывающего белка специфично подавляют уже начавшийся иммунный ответ на антиген.

Для изучения структурной основы этой активности была использована деградация очищенных Т-супрессорных молекул (Тс) под действием протеоли-тических ферментов. Хотя белок с весом 70 кДа чувствителен к различным про-теиназам, включая трипсин и пепсин, наиболее воспроизводимые результаты дает обработка папаином: этот фермент расщепляет почти 100% антигенсвязывающего 70 кДа белка на две субъединицы с молекулярной массой 45 и 24 кДа. Обе субъединицы оказались резистентными к дальнейшему протеолизу и в сумме по массе составляли 70—85% продуктов протеолиза 70 кДа белка. Для обоих продуктов протеолиза была определена их биологическая активность. Субъединица с молекулярной массой 45 кДа сохраняла супрессорную активность, но не связывалась с антигеном; пептид с массой 24 кДа специфично связывался с антигеном, но не обладал супрессорными свойствами.

Замечательно, что связывание нативного белка 70 кДа с антигеном само приводит к расщепленшо и образованию тех же субъединиц 45 и 24 кДа. Они обладают теми же биологическими активностями, что и пептиды, образующиеся после ферментативного протеолиза исходной молекулы. Субъединицы с весом 45 и 24 кДа можно различить серологически. Антитела, полученные против миеломных белков и узнающие Ун-последовательность иммуноглобулинов, реагируют с исходной 70 кДа молекулой, а также с ее субъединицей 24 кДа, но не реагируют с 45 кДа субъединицей. Кроличьи антитела, реагирующие с неко-торыми другими 70 кДа молекулами Тс, обладающими различной антигенной специфичностью, связываются с 45 кДа субъединицей, но не реагируют с 24 кДа -субъединицей Тс.

Таким образом, биологическая активность исходной молекулы определяется суммой активностей 45 кДа и 24 кДа пептидов. Эти два пептида представляют собой, видимо, два различных домена белка Тс (табл. 4.3). В принципе возмож
но, хотя и очень маловероятно, что 24 кДа пептид представляет собой продукт деградации 45 кДа пептида. Для окончательного доказательства того, что эти пептиды соответствуют независимым доменам исходной 70 кДа молекулы, необходимо определить аминокислотную последовательность и проанализи-ровать мРНК, кодирующую 70 кДа белок (см. гл. 18, где приводится подроб-ный обзор на эту тему).